| MSAP技术服务 | |
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生物探索者 等级 ★ 0 楼 发表于 2016/8/15 9:40:20 编 辑 |
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MSAP技术服务 甲基化敏感扩增多态性，它是在扩增片段长度多态性技术的基础上建立起来的。MSAP技术相对其他测定DNA甲基化程度技术有如下优点：（1）不需知道被测DNA的序列信息，在不同生物上具有通用性，可用于DNA序列背景知识未知的生物。（2）操作相对简便，在AFLP技术体系的基础上不需要太大改进，即可操作。（3）可在全基因组范围检测CCGG位点的胞嘧啶甲基化变化。MSAP技术的局限性在于不能完成非CCGG位点的胞嘧啶甲基化。 MSAP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测，传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳（FISH）进行检测。 PAGE方法主要是优点是引物可以是普通引物，适用于少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适，另外还可以对差异条带进行克隆测序，获得差异条带的序列信息。 毛细管电泳检测方法的优点是自动化，可以对大量样本进行实验，速度快，后期的条带读取可以依靠软件，降低了人为读取的标准不一。 1）MSAP服务内容 1 样本基因组DNA的提取 2 筛选多态性较好的引物（酶切，预扩，选择性扩增） 3-1 在ABI3730xl测序仪上完成数据采集 3-2 或是在JY-CX2B型 测序电泳槽上完成PAGE 检测（可以回收差异带） 数据分析：和客户详细沟通，确认分析方案：读取01矩阵，PAGE胶建议客户自己读取； 2）客户提供： ★ 基因组DNA： ●至少15μL样品，浓度为50-100ng/μL； ●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带，没有降解； ●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化； ●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里； ●DNA溶解后，肉眼看不到杂色； ★ 植物材料： 新鲜组织，叶片采用硅胶干燥后或干冰运输； ★ 动物材料： 新鲜组织，无水乙醇封存低温运输； 3）试验费用： MSAP 按照96个样本进行随机8对引物计算，提供01矩阵； 单价 数量 合计 DNA提取 30 96 2880 引物 300 0 0 酶切 40 192 7680 预扩 10 192 1920 选择性扩增 5 1536 7680 毛细管检测 800 16 12800 分析 2000 1 2000 29888 MSAP 按照25个样本进行随机8对引物计算，提供PAGE胶图 单价 数量 合计 DNA提取 30 25 750 纯化 10 25 250 酶切 40 50 2000 预扩 10 50 500 选择性扩增 5 400 2000 PAGE检测 800 8 6400 分析 2000 1 2000 13900 |
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