| AFLP 技术服务 | |
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生物探索者 等级 ★ 0 楼 发表于 2016/8/15 9:31:26 编 辑 |
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AFLP 技术服务 AFLP标记技术是1993年由荷兰的Zabeau和Vos博士提出并完善的。现已广泛应用于生物多样性，指纹图谱的构建，遗传图谱的构建，基因克隆等诸多研究领域，显示了广阔的应用前景。AFLP与其他分子标记相比具有：1、DNA 用量少；2、可重复性好；3、多态性强；4、分辨率高；5、样品适用性广，6、对基因组序列信息依赖性低等优点。在物种的多态性分析中获得广泛的应用。AFLP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测，传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳进行检测。 PAGE方法主要是AFLP的选择扩增产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到分离，然后通过银染将条带显现出来，然后通过照相得到相应的图片，优点是引物可以是普通引物，价格相对较低，做少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适，另外还可以对差异条带进行克隆测序，获得差异条带的序列信息。 毛细管电泳检测方法的优点是自动化，可以对大量样本进行实验，速度快，后期的条带读取可以依靠软件，降低了人为读取的标准不一。 1）AFLP服务内容 1 样本基因组DNA的提取 2 筛选多态性较好的引物（酶切，预扩，选择性扩增） 3-1 在ABI3730xl测序仪上完成数据采集 3-2 或是在JY-CX2B型 测序电泳槽上完成PAGE检测（可以回收差异带） 4 数据分析：和客户详细沟通，确认分析方案：读取01矩阵（PAGE胶读取另外收费）；聚类分析；多样性分析；多态位点数(AP)、多态位点百分率(P)、平均等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei′s基因多样性指数(H)、Shannon′s信息指数(I)、遗传分化度(Gst)等。利用NTSYS进行聚类分析。 2）目前已经进行的样本类型：树木，草，花卉，昆虫，鱼类，虾类，真菌等； 3）客户提供： ★ 基因组DNA： ●至少15μL样品，浓度为50-100ng/μL； ●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带，没有降解； ●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化； ●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里； ●DNA溶解后，肉眼看不到杂色； ★ 植物材料： 新鲜组织，叶片采用硅胶干燥后或干冰运输； ★ 动物材料： 新鲜组织，无水乙醇封存低温运输； 4）报价体系： AFLP 按照96个样本进行随机8对引物计算，提供01矩阵； 单价（元） 数量 合计 DNA提取 30 96 2880 纯化 10 96 960 引物 300 0 0 FAM标记，其他标记350元 酶切 40 96 3840 预扩 10 96 960 选择性扩增 5 768 3840 毛细管检测 800 8 6400 分析 2000 1 2000 20880 AFLP 按照50个样本进行随机8对引物计算，提供PAGE胶图 单价 数量 合计 DNA提取 30 50 1500 纯化 10 50 500 酶切 40 50 2000 预扩 10 50 500 选择性扩增 5 400 2000 PAGE检测 800 8 6400 分析 2000 1 2000 14900 图1 PAGE检测引物筛选图 图2 毛细管电泳检测大量样本图 |
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